钼钒酸显色液的使用由什么是要注意的吗

 

　　通常的钼钒酸显色液由多个组份组成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致检测结果不太稳定。本钼钒酸显色液采用了新的TMB显色技术，把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。

 

　　使用之前，以超纯水反复洗涤的适当容器，倒出适量单组分钼钒酸显色液，待溶液达到室温即可使用。加液：加完HRP结合物并温育一定时间后，洗板3－5次，每孔加TMB底物100－150uL，37°C温育15－30分钟。 

 

　　终止（备选）：加等体积的1N的HCl或者2N的H2SO4来终止反应。酶标孔中反应液从蓝色变为黄色。读数：终止反应后，30分钟内在450nm处读数。不加终止液，显色更加稳定，可以在620－650nm处读数。 

 

　　注意： 

 

　　降低底物强度：如果出现高的反应背景和/或沉淀，表明钼钒酸显色液反应过于强烈。为了避免产生沉淀，可以在加入终止液后马上读数；另外，可以进一步稀释一抗和/或HRP结合物。为了降低非特异性背景颜色，空白进一步降低一抗和/或HRP结合物的浓度，尽量避免降低底物浓度。